為什么用分光光度計測量吸光度時讀數(shù)會不斷變化？
更新時間：2020-11-13 點(diǎn)擊次數(shù)：11957次
為什么用分光光度計測量吸光度時讀數(shù)會不斷變化？是因為顏色反應(yīng)還沒有完成嗎？經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)并非如此。靈敏度越高，吸光值頻移越大。分光光度計的設(shè)計原理和工作原理允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，儀器具有一定的精度和準(zhǔn)確度。
1.樣品稀釋濃度
樣品的稀釋濃度也是一個不可忽視的因素，因為樣品中，尤其是核酸樣品中，不可避免地存在一些細(xì)小的顆粒。這些小顆粒的存在干擾了測試結(jié)果。為了在很大程度上減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸的吸光值至少應(yīng)大于0.1A，吸光值應(yīng)優(yōu)選在0.1和1.5a之間.在這個范圍內(nèi)，粒子的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。這意味著樣品的濃度不能太低或太高(超出光度計的測量范圍)。
2.核酸本身的物理化學(xué)性質(zhì)
溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等也會導(dǎo)致檢測時的讀數(shù)漂移。所以建議使用一定pH值和較低離子濃度的緩沖液(如TE)來大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值效應(yīng)受緩沖溶液的酸堿度和離子濃度的影響。只有在一定的pH值和低離子濃度(如10mt ris-hclph 8.0)下，才能獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測誤差。一些緩沖劑在紫外線范圍內(nèi)吸收自身。為確保準(zhǔn)確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
3.分光光度計的操作因素
1)使用儀器前，用戶應(yīng)首先了解儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各控制旋鈕的功能。
2)儀器應(yīng)放置在干燥的室內(nèi)，使用時放置在牢固穩(wěn)定的工作臺上。室內(nèi)光線不宜太強(qiáng)。熱天不能用電風(fēng)扇直接吹樂器，以免燈泡燈絲不穩(wěn)定發(fā)光。
3)接通電源前，應(yīng)檢查儀器的安全性能，電源接線應(yīng)牢固，通電應(yīng)良好，各調(diào)節(jié)旋鈕的啟動位置應(yīng)正確，然后接通電源開關(guān)。當(dāng)儀器沒有連接到電源時，血糖儀的指針必須在“0”劃線上。否則，可以用儀表上的校正螺釘進(jìn)行調(diào)整。
4)如果測試波長變化較大，請稍等，燈處于熱平衡后，重新校準(zhǔn)“0”和“100”點(diǎn)，然后再次測量。
5)使用完比色皿后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布擦去水跡，防止表面光滑度受損，影響比色皿的透光率。
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